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項(xiàng)目介紹

RIP-seq（RNA Immunoprecipitation）是研究細(xì)胞內(nèi)蛋白與RNA相互作用的技術(shù)，是了解轉(zhuǎn)錄后調(diào)控網(wǎng)絡(luò)動態(tài)過程的有力工具，能更有效地發(fā)現(xiàn)miRNA的調(diào)節(jié)靶點(diǎn)。

技術(shù)原理

RIP-seq是運(yùn)用針對目標(biāo)蛋白的抗體把相應(yīng)的RNA-蛋白復(fù)合物沉淀下來，然后經(jīng)過分離純化就可以對結(jié)合在復(fù)合物上的RNA進(jìn)行測序分析。 RIP可以看成是普遍使用的染色質(zhì)免疫沉淀RIP技術(shù)的類似應(yīng)用，但由于研究對象是RNA-蛋白復(fù)合物而不是DNA-蛋白復(fù)合物，因此RIP實(shí)驗(yàn)的優(yōu)化條件與RIP實(shí)驗(yàn)并不相同。RIP實(shí)驗(yàn)下游結(jié)合二代測序技術(shù)稱為RIP-seq，通過高通量測序和分析，深度解析與目標(biāo)蛋白相互結(jié)合的RNA的區(qū)域或種類和相互作用強(qiáng)弱。

應(yīng)用

RIP-seq技術(shù)可用于研究蛋白質(zhì)與RNA的直接作用、蛋白在轉(zhuǎn)錄層面相互作用、研究與蛋白結(jié)合的RNA序列。

實(shí)驗(yàn)流程